36.1 高效液相色譜分析法

時間：2006-12-08 來源： 作者：

36.1.1  范圍

本章規(guī)定了用高效液相色譜法 （以下簡稱 HPLC）測定城市污水中陰離子表面活性劑（以下簡稱LAS）含量的方法。

本方法測定 LAS的最小絕對量為2ng，濃度范圍為1mg/L～100mg/L。LAS小于1mg/L時，可在 NaCl存在下用甲基異丁基酮 （MIBK）萃取后測定。

36.1.2  方法原理

LAS含有一個芳香環(huán)，具有共軛雙鍵，當(dāng)吸收紫外光后，非定域 π電子受到激發(fā)，由基態(tài)躍遷到第一電子激發(fā)態(tài)，當(dāng)受激發(fā)電子很快返回基態(tài)時發(fā)出熒光，故可采用高靈敏度、高選擇性的熒光檢測器測定，通過自動掃描找出最佳激發(fā)波長為232nm，發(fā)射波長為290nm。同時，由于HPLC選用具有高效分離能力的色譜柱，使方法的選擇性更好。根據(jù)保留時間定性，根據(jù)峰面積定量。

36.1.3  試劑和材料

36.1.3.1  甲醇：光譜純。

36.1.3.2  甲基異丁基酮 （MIBK）：分析純。

36.1.3.3  十二烷基苯磺酸鈉標(biāo)樣：1.000mg/mL（BW3160），在4℃冰箱中保存。

36.1.3.4  氯化鈉：1mol/L，稱取58.8g氯化鈉溶解于1000mL水中。

36.1.3.5  0.45μm 水相微孔濾膜。

36.1.3.6  高純氮氣。

36.1.3.7  高純氦氣。

36.1.3.8  超純水：達(dá)到18MΩ·cm

36.1.4  儀器

36.1.4.1  高效液相色譜儀：配置二元以上溶劑輸送系統(tǒng)，流速范圍 0.000mL/min～5.000mL/min，壓力范圍0～400b ar。

36.1.4.2  熒光檢測器：激發(fā)波長范圍190nm～800nm，發(fā)射波長范圍190nm～900nm。

36.1.4.3  數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：與高效液相色譜儀相配套。

36.1.4.4  微徑液相色譜柱：ODS柱��2.1mm×200mm，5μm。

36.1.4.5  微孔過濾器。

36.1.4.6  微量注射器，1000μL。

36.1.5  樣品

36.1.5.1  采樣

采樣瓶必須經(jīng)洗液、酸浸泡后再用蒸餾水沖洗干凈，不得用洗滌劑清洗。

36.1.5.2  樣品保存

如不立即分析，允許在4℃保存。

36.1.6  分析步驟

36.1.6.1  測定

36.1.6.1.1  HPLC分析條件 （該條件可根據(jù)實際分析情況進(jìn)行調(diào)整）

流動相組成 甲醇：水＝98∶2

流速：0.4mL/min

柱溫：40.0℃±0.1℃

進(jìn)樣體積：0.4μL～5μL

激發(fā)波長 Eｘ＝232nm

發(fā)射波長 EM＝290nm

36.1.6.2.1  樣品預(yù)處理

36.1.6.2.1.1  對于LAS濃度大于1mg/L的實驗樣品，經(jīng)過0.45μm 的微孔濾膜過濾后作為試料，取少量濾液，直接進(jìn)行 HPLC分析。

36.1.6.2.1.2  LAS濃度小于1mg/L的實驗樣品，經(jīng)靜置自然沉降后，取上清液20mL作為試料，于比色管中，加2mL1mol/L的氯化鈉溶液 （36.1.3.4）搖勻后加2mL MIBK（36.1.3.2）振搖2min，注意放氣，靜置片刻待分層，取少量有機相，進(jìn)行 HPLC分析。

36.1.6.2.2  樣品進(jìn)樣分析

將預(yù)處理后的樣品用微量注射器注入進(jìn)樣器樣品瓶中，待儀器運行穩(wěn)定后，進(jìn)樣分析。注意，分析過程中必須經(jīng)常清洗進(jìn)樣器。

36.1.6.2.3  定性分析

當(dāng)未知物峰的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)峰的保留時間相差在3%～5%的范圍內(nèi)，即認(rèn)為該未知物和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)物是同一物質(zhì)。

36.1.6.2.4  定量分析

根據(jù)定性結(jié)果與峰面積值，利用校準(zhǔn)曲線，通過數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)計算出樣品中 LAS的濃度 （mg/L）。

36.1.6.3  校準(zhǔn)曲線的繪制

36.1.6.3.1  LAS含量在1mg/L～100mg/L時的校準(zhǔn)曲線

在給定的分析條件下，將LAS標(biāo)準(zhǔn)溶液按濃度由低到高的次序（2.00mg/L、4.00mg/L、6.00mg/L、8.00mg/L、10.0mg/L和10.0mg/L、20.0mg/L、40.0mg/L、60.0mg/L、80.0mg/L、100mg/L二組）直接進(jìn)行 HPLC儀分析，分別以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，通過數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，得到校準(zhǔn)曲線。

36.1.6.3.2  LAS含量小于1mg/L時的校準(zhǔn)曲線

在25mL具塞比色管中配制20.0mLLAS濃度為0.20mg/L、0.40mg/L、0.60mg/L、0.80mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列，然后按照36.1.6.2.1.2步驟進(jìn)行 HPLC儀分析，得相應(yīng)峰，通過數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)得到校準(zhǔn)曲線。

36.1.7  分析結(jié)果的表述

根據(jù)保留時間確定樣品中是否存在 LAS。如果存在，通過數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)求出 LAS濃度 （mg/L），結(jié)果精確至0.01mg/L。

36.1.8  精密度和準(zhǔn)確度

3個實驗室分別對0.100mg/L、0.500mg/L、0.900mg/L 和 10.0mg/L、50.0mg/L和90.0mg/L六種不同濃度的LAS標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行了18次測定，方法相對誤差置信范圍為（－1.56±2.39）%。

3個實驗室以廢污水為本底用進(jìn)行了加標(biāo)測定，回收率置信范圍為 （101.0±5.6）%。